钙蓝素,AM是美国AAT Bioquest生产的细胞渗透性，它是钙黄绿素的细胞渗透型。进入活细胞后，弱荧光钙黄绿素AM被水解成钙黄绿素，其激发/发射大值与DAPI，Hoechst和AMCA相似。与典型的绿色和红色荧光团（如FITC，TMR和德克萨斯红）的这种特殊光谱分离为多路复用实验提供了额外的选择。因为钙黄绿素AM本身是荧光的，所以可能需要适当的过滤器组和额外的洗涤步骤以使背景荧光小化。我们的钙测定缓冲液可用于有效洗涤细胞外钙黄绿素。

1. 百萤 钙蓝素AM 参数：

E x(nm)       354

E m(nm)       441

分 子 量        465.41

溶    剂        DMSO

存储条件        在零下15度以下保存，避免光照

 C A S        168482-84-6

2. 百萤 钙蓝素AM适用仪器

流式细胞仪

Ex:     350nm or 405nm

Em:     450/40 nm

通道:   Pacific Blue通道

 荧光显微镜

Ex:     DAPI滤波片组

Em:      DAPI滤波片组

推荐孔板:   黑色透明底板

荧光酶标仪

Ex:          360nm

Em:          450 nm

Cutoff:      420nm

推荐孔板:    黑色透明底板

读取模式:    底读模式

3. 百萤 钙蓝素AM实验方案

操作步骤

（1）准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

（2）在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Calcein Blue，AM * CAS 168482-84-6 *储备液。
（2.1）卡介素蓝量，AM * CAS 168482-84-6 *使用量：1毫克
（2.2）所需浓度：2 mM
（2.3）在合适的容器中，将1mg钙黄绿素，AM * CAS 168482-84-6 *与1074.32μL无水DMSO混合。
 （3）用含有10μM钙黄绿素的HHBS制备2X工作溶液，AM * CAS 168482-84-6 * 4，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
（3.1）Calcein Blue的终孔内浓度，AM * CAS 168482-84-6 *：5μM
（3.2）Pluronic®F-127的终孔内浓度：0.04％
（3.3）终孔内浓度的丙磺舒：1mM
（3.4）在合适的容器中混合16μL钙黄绿素，AM * CAS 168482-84-6 *，25.6μL10％Pluronic®F-127和256μL25mM Probenecid。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议终浓度为Calcein Blue，AM * CAS 168482-84-6 *为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 （4）将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
（4.1）此步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的终浓度调整为以下：5μM钙黄绿素，AM * CAS 168482-84-6 *，0.04％Pluronic®F-127,1 mM丙磺舒。

 （5）孵育染料
（5.1）将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-60分钟。
（5.2）将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 （6）用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。 接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
 （7）用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
（7.1）首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
（7.2）在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 （8）运行实验
（8.1）为您的样品添加所需的处理。
（8.2）以Ex / Em = 360/445 nm运行实验。