公司动态
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Cy3酪胺（Cy3 tyramide），是一种用于荧光信号放大的探针，通过HRP和过氧化氢催化，标记到抗体上。经常有小伙伴问小萤Cy3酪胺的实验方案，那么，教程来啦，小萤手把手教您做实验！
Cy3 酪胺（Cy3 tyramide）是美国AAT Bioquest生产的Cy系列产品，该产品适合标记抗体或蛋白,应用于细胞或组织。
1.检测灵敏度高；
2.荧光信号增强；
3.减少非特异性背景信号；
4.可以使用标准Cy3过滤器组轻松检测。
荧光显微镜
Ex: Cy3/TRITC滤波片
Em: Cy3/TRITC滤波片
推荐孔板：黑色透明底板
滤波片：Cy3/TRITC滤波片
样品染色示例
概述
1.固定/透化/阻断细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入HRP标记的二抗
4.准备酪胺工作溶液，室温下将其用于细胞或组织中5-10分钟
溶液配置
储备溶液配置
在没有额外说明的情况下，所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融
制备储备溶液（1000x）
加入适量的DMSO，制成1-5mM的酪胺储备液。
注意：未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下储存
工作溶液配置
酪胺工作溶液（1X）
将1μLTyramide原液加入1 mL含有0.003％H2O2的缓冲液中。
注意：1.Tris Buffer，pH = 7.4效果最佳。
2. Tyramide工作溶液即用即配。
实验方案
（本方案适用于细胞核组织染色）
细胞固定和透化
1. 在室温下，用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。
2. 2.用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.在室温下，用0.1％Triton X-100溶液使细胞透化1-5分钟。
4.用PBS冲洗细胞或组织两次。
注意：组织固定，脱蜡和再水化，根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水。根据需要，使用优选的特定溶液/方案进行抗原修复。
过氧化物酶标记
1.可选：将细胞或组织样本置于过氧化物酶淬灭液（如3%过氧化氢）中孵育10分钟，以淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下，用PBS冲洗两次。
2.可选：如果使用HRP偶联的链霉抗生素蛋白，建议通过生物素阻断缓冲液来阻断内源性生物素。
3.用封闭溶液（如含有1％BSA的PBS）在4℃下封闭30分钟。
4.取出封闭溶液，加入稀释好的一抗，在室温下孵育60分钟或在4°C下孵育过夜。
5.用PBS洗涤三次，每次5分钟。
6.向每个样品中加入100μL二抗-HRP工作溶液，在室温下孵育60分钟。
注意：孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
7.用PBS洗涤三次，每次5分钟。
酪胺标记
1.准备100μL 酪胺工作溶液，将其应用于每个样品，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果您观察到非特异性信号，可以缩短酪胺的孵育时间。 您应使用不同孵育时间点的阳性和阴性对照样本，以优化孵育期。 或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。
2.用PBS冲洗三次
复染和荧光成像
1.根据需要，对细胞或组织样本复染。 AAT提供了一系列细胞核复染试剂，如表1所列。按照试剂说明书进行操作。
2.加上盖玻片。
3.使用适当的滤波器观察酪胺标记的信号。
表1.推荐用于核复染的产品
