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色彩的科学:花青染料在荧光分析中的奇妙之旅

2025-01-20

花青染料通常表现出非常大的摩尔吸收率(约150000至300000M-1 cm-1)以及适度的量子产率,从而产生及其明亮的荧光信号。事实证明,花青在许多领域都非常有用,包括生物成像细胞学荧光技术分析化学等,对于某些生物学应用,花青可以有利地替代其他常规染料,它们也可以应用在各种生物学

 

常见的花青染料

 

花青染料中常使用的是发黄绿色荧光Cy3(Ex:550nm,Em:570nm)和发红色荧光的Cy5(Ex:650nm,Em:670nm)。由于它们具有少量光谱重叠,Cy3和Cy5通常组合为2色检测。Cy3可通过各种荧光仪成像仪器具有TRITC标准滤波片的显微镜来检测。由于Cy5消光系数高,它以成为远红色荧光染料的流行替代品。

图为Cy3(左)、Cy5(中)、Cy7(右)的激发和发射光谱


表一.花青染料的光谱特性

花青染料

激发光线(nm)

Ex/Em(nm)

滤波片组

消光系数

荧光量子产率

Cy3

532

554/568

Cy3/TRITC

150000

0.15

Cy5

633-647

650/669

Cy5

250000

0.27

Cy7

730

754/778

Cy7

250000

0.3


磺化与非磺化花青染料

 

磺化与非磺化花青染料具有非常相似的荧光特性,在许多应用中可以互换使用。它们之间的差异主要在于溶解度。磺化的为水溶性,非磺化的则为脂溶性


2.磺化与非磺化花青的比较

Cy3

Cy5

Cy7

形式

磺化

非磺化

磺化

非磺化

磺化

非磺化

Ex/Em(nm)

554/568

650/669

754/778

滤波片组

Cy3/TRITC

Cy5

Cy7

消光系数

150000

140000

250000

230000

250000

250000

荧光量子产率

0.10

0.07

0.27

0.16

0.12

0.2