细胞活性检测试剂盒的核心检测方法围绕“代谢活性、细胞膜完整性、增殖能力”三大维度，验收标准需覆盖准确性、精密度、稳定性等关键性能指标，以下是具体分类与细节：

一、核心检测方法（按原理分类）

1. 代谢活性检测法（常用）

MTT法：基于活细胞线粒体脱氢酶将黄色MTT还原为蓝紫色甲臜结晶，结晶量与细胞活性正相关。经DMSO溶解后，通过酶标仪检测570nm处吸光度（A值），计算细胞活性。

CCK-8 法：CCK-8试剂中的水溶性四唑盐被脱氢酶还原为橙色甲臜，无需裂解细胞，直接检测450nm处A值。操作更简便、毒性更低，适合长期细胞活性监测。

WST-1/Cell Counting Kit-8类似法：原理与CCK-8一致，不同在于试剂稳定性和检测波长略有差异（WST-1检测波长约420nm），适配不同细胞培养体系。

2. 细胞膜完整性检测法

台盼蓝染色法：台盼蓝为阴离子染料，无法穿透活细胞完整细胞膜，死细胞因膜破损被染色。通过显微镜计数染色细胞与总细胞比例，直接判断细胞活性。

乳酸脱氢酶（LDH）释放法：死细胞细胞膜破裂，胞内LDH释放到培养基中，LDH催化底物生成有色产物，检测490nm处A值，释放量与死细胞数量正相关，间接反映细胞活性。

3. 细胞增殖相关检测法

BrdU掺入法：BrdU作为胸腺嘧啶类似物，在细胞增殖时掺入DNA中，通过特异性抗体结合BrdU，经荧光检测或比色法定量，反映增殖活跃的细胞比例（即活性细胞占比）。

EdU检测法：EdU比BrdU更易穿透细胞膜，无需变性DNA即可与荧光染料结合，检测灵敏度更高，操作更快捷，适合高通量筛选。

二、关键验收标准（按性能维度）

1. 准确性（真实反映细胞活性）

用已知活性的标准细胞株（如 L929、HepG2）验证，检测结果与细胞实际活性偏差≤±10%。

空白对照组（无细胞）与阴性对照组（100%活性细胞）的A值差值需≥0.5（酶标法），确保信号区分度。

台盼蓝染色法的活细胞计数结果，与CCK-8法检测的活性值一致性需≥90%。

2. 精密度（检测结果重复性）

批内精密度：同一批次细胞活性检测试剂盒检测同一样本，连续6次检测的相对标准偏差（RSD）≤8%。

批间精密度：3个不同批次细胞活性检测试剂盒检测同一样本，各批次间RSD≤10%，确保不同批次性能稳定。

3. 灵敏度与线性范围

灵敏度：能准确检测的最低细胞浓度≤1×103cells/孔（96孔板），低于该浓度仍能区分空白与样品信号。

线性范围：在1×103~1×10?cells/孔范围内，细胞浓度与检测A值的线性相关系数（R2）≥0.99，确保不同浓度细胞的活性检测准确。

4. 稳定性（试剂存储与使用稳定性）

储存稳定性：按说明书条件储存（如2~8℃冷藏、-20℃冷冻），有效期内（通常6~12个月），检测灵敏度下降≤10%，批内RSD仍符合≤8%要求。

操作稳定性：试剂复溶后，在室温避光条件下放置4小时内，检测结果偏差≤±5%；孵育时间波动±10%时，结果偏差≤±8%，适配实验操作容错性。

5. 特异性与抗干扰性

特异性：仅对活细胞产生特异性信号，死细胞（经乙醇固定或高温灭活）的检测信号≤空白对照组的15%。

抗干扰性：面对培养基中常见成分（如血清、抗生素、葡萄糖），或试验中可能添加的溶剂（如DMSO浓度≤0.5%），检测结果偏差≤±10%，不影响细胞活性判断。

6. 安全性与合规性

试剂无明显毒性，与细胞共孵育后，对正常细胞活性的抑制率≤5%（符合细胞培养安全要求）。

含有的防腐剂（如ProClin）、染料等成分，符合体外诊断试剂安全标准，无挥发性有害物质释放。

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