产品优势
稳定性好,可轻松适配高通量检测
适用范围
用于监测细胞凋亡
样本实验方案
简要概述
1.用测试化合物(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)制备细胞
2.加入等体积的Caspase 3/7工作溶液
3.在室温下孵育1小时
4.监测Ex / Em = 540/620 nm处的荧光强度(截止= 610 nm)
溶液配制
储备溶液配制
1.Z-DEVD-ProRed 储备溶液(200X):
将65 μL DMSO加到Z-DEVD-ProRed (组分A)的小瓶中,制成200X Z-DEVD-ProRed 储备液,避光储存。
工作溶液配制
将50μL的200X Z-DEVD-ProRed 储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液(组分B)中,并充分混合以制成Caspase 3/7底物工作溶液。
注意:分装并在-20℃下存储未使用的Z-DEVD-ProRed 储备溶液(来自步骤2.2)和测定缓冲液(组分B)。 避免反复冻融。
有关细胞样品制备的指南,请点击查看。
操作步骤
1.准备细胞:
1.1 对于贴壁细胞:将细胞在生长培养基中以20,000个细胞/孔/ 90 uL接种96孔,或以5,000个细胞/孔/ 20 uL接种384孔,过夜培养。
1.2 对于非贴壁细胞:从培养基中离心细胞,然后将细胞沉淀以80,000至200,000个细胞/孔/ 90 uL悬浮在培养基中,用于96孔;或20,000至50,000个细胞/孔/ 20 uL用于384个细胞。 实验前,将板以800 rpm的速度离心2分钟。
注意:应单独评估每种细胞系,以确定诱导凋亡的佳细胞密度。
2.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10 μL /孔的10X测试化合物(96孔板)或5 μL /孔的5X测试化合物(384孔板)来处理细胞。对于空白孔(不含细胞的培养基),添加相同量的化合物缓冲液。
3.将细胞板在37°C,5%CO2的培养箱中孵育(对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为3-4小时)以诱导凋亡。
4.加入Caspase 3/7底物工作溶液(100 μL /孔/ 96孔板或25 μL /孔/ 384孔板。)
5.在避光的条件下,在室温下孵育平板至少1小时。
注意:如果需要,在室温下添加Caspase 3/7工作溶液之前10分钟,向选定的样品中添加1 μL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂,以确认对caspase 3 / 7-like的抑制活动。
6.使用荧光酶标仪(Ex / Em = 540/620 nm(截止= 610 nm))监控荧光强度。
注意:有时,底部读取可提供更好的信噪比。如果使用底部读取模式,则以800 rpm的速度离心细胞板(特别是悬浮细胞)2分钟(制动)。
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