产品介绍 Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒是一套用于监测细胞活力的专业工具。细胞活力可通过多种参数进行评估,本试剂盒通过检测磷脂酰丝氨酸(PS)外翻现象特异性监测细胞凋亡过程。在凋亡发生时,PS会从细胞膜内侧转移至外侧,其细胞表面暴露可作为凋亡早期/中期的普适性标志物,且该检测信号早于细胞形态学变化出现。 Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒采用小分子荧光探针Apopxin™ PS探针,其与PS的结合亲和力(Kd < 10 nM)显著高于膜联蛋白V。该探针与膜PS结合后呈现深红色荧光,兼具微孔板、荧光显微镜和流式细胞仪多平台兼容优势(常规凋亡检测试剂通常仅适用于单一平台) 样品实验方案 摘要 1.制备含测试化合物的细胞样本(96孔板:100 μL/孔;384孔板:25 μL/孔) 2.加入等体积的Apopxin™Deep Red工作溶液 3.在室温下孵育1小时 4.使用荧光酶标仪(底部读数模式,Ex/Em = 650/680 nm,截止波长665 nm)或配备 Cy5滤片的荧光显微镜检测荧光强度 工作液配制 取10 μL 100X Apopxin™Deep Red(组分A)加入1 mL检测缓冲液(组分B),混匀配制成工作液 注:每孔需100 μL工作液,现配现用 实验操作流程 1.96孔板每孔加入10 μL 或者384孔板每孔加入2.5 μL 10x测试化合物母液(溶于PBS或指定缓冲液),空白对照孔(无细胞培养基)加入等量缓冲液 2.将细胞板置于5% CO?、37℃培养箱孵育(如:Jurkat细胞用星形孢菌素处理4-6小时) *注:喜树碱等化合物在405 nm激发时可能因380-490 nm宽发射光谱导致假阳性* 3.在每个孔中添加100 μL /孔(96孔板)或25 μL /孔(384孔板)的Apopxin™Deep Red工作溶液。 4.室温避光下孵育细胞板≥1小时。 5.(特别针对悬浮细胞)800 rpm离心2分钟(关闭刹车功能) 6.使用荧光酶标仪(底部读数模式,Ex/Em = 650/680 nm,截止波长665 nm)或配备 Cy5滤片的荧光显微镜检测荧光强度 注:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!