trFluor Eu琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光染料 ,在细胞、血清或其他生物流体中的许多生物化合物是天然发光的,因此使用常规的快速荧光团导致测定灵敏度的严重限制,这是由于待测定的生物分子的自发荧光引起的高背景。使用长寿命荧光团结合时间分辨检测(激发和发射检测之间的延迟)可以*限度地减少瞬间荧光干扰。 AAT Bioquest的trFluor Tb和trFluor Eu蛋白探针可为需要高灵敏度的分析启用时间分辨荧光测定(TRF)。与更传统的荧光团如Alexa Fluor或花青染料相比,这些trFluor 探针具有较大的斯托克斯位移和极长的发射半衰期。与其他TRF化合物相比,我们的trFluor Eu和trFluor Tb探针具有相对高的稳定性,高发射产率和与生物分子相关的能力。此外,我们的trFluor Eu和trFluor Tb探针在与抗体等生物聚合物结合时对荧光猝灭不敏感。
琥珀酰亚胺基(NHS)酯被证明是用于胺修饰的*试剂,因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时,需要考虑的因素很少:1)溶剂:在大多数情况下,活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO)中。 2)反应pH:胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应,包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的氨基基团。因此,胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3)反应缓冲液:当使用胺反应试剂时,必须避免使用含有游离胺如Tris和甘氨酸和硫醇化合物的缓冲液。在进行染料结合之前,还必须除去广泛用于蛋白质沉淀的铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)(例如通过透析)。 4)反应温度:大多数缀合在室温下进行。然而,对于特定的标记反应,可能需要升高或降低的温度。
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