当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时,需要考虑的因素很少:1)溶剂:在大多数情况下,活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO)中。 2)反应pH:胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应,包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此,胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3)反应缓冲液:使用胺反应试剂时,必须避免使用含有游离胺(如Tris和甘氨酸)和硫醇化合物的缓冲液。广泛用于蛋白质沉淀的铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)也必须在进行染料缀合之前除去(例如通过透析)。 4)反应温度:大多数缀合在室温下进行。