mFluor Green 620琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光标记染料 ,mFluor 染料是一系列优秀的荧光标记染料,可以覆盖整个可见光谱。所有mFluor 染料都具有出色的水溶性和大的斯托克斯移位。它们的亲水性使有机溶剂的使用最小化。mFluor 染料主要用于标记多色流式细胞仪应用的抗体。
琥珀酰亚胺基(NHS)酯被证明是用于胺修饰的*试剂,因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺表现出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时,需要考虑的因素很少:1)溶剂:在大多数情况下,活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO)中。 2)反应pH:胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应,包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此,胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3)反应缓冲液:当使用胺反应试剂时,必须避免使用含有游离胺如Tris和甘氨酸和硫醇化合物的缓冲液。在进行染料结合之前,还必须除去广泛用于蛋白质沉淀的铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)(例如通过透析)。 4)反应温度:大多数缀合在室温下进行。然而,对于特定的标记反应,可能需要升高或降低的温度。