Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于流式细胞仪橙色检测

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简要概述

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮 活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供*质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。

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产品说明书

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×106细胞/ mL）
2.将1 μL 500X Nitrixyte 橙色加入0.5 mL细胞悬液中
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Orange在37°C下孵育
4.用流式细胞仪分析

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照储备溶液（50 mM）：
将200 μL ddH2O加入小瓶NONOate阳性对照液（组分B）中，制成50 mM储备液。

2.工作溶液

2.1 NONOate阳性对照
用测定缓冲液（组分C）将NONOate阳性对照原液稀释至1-2 mM工作溶液。

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样品操作及实验分析

1.向0.5 mL细胞悬液中加入1 μL 500X Nitrixyte 橙色（组分A）。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nitrixyte Orange孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

2.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Orange在37°C下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37°C的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与1X Nitrixyte Orange，20 μg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

3.降低已经用Nitrixyte Orange预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37°C孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

4.使用流式细胞仪监测FL2通道（Ex / Em = 488/590 nm）处的荧光强度。